为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过过滤器(www.rfilter.com)过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
扩增室该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪,本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。
在实验室建造过程中,需要给PCR仪配备专门的UPS电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差,在控制上比较容易实现。
排风分为换气与局部排风两部分,排风口一般位于排风柱的下部,设可调带过滤网的百叶风口,送风口采用过滤送风口。局部排风为房间设置Ⅱ级B2型生物安全柜的局部排风,柜面风速要求不小于5m/s,生物安全柜独立设置排风系统,排风口要求设置在建筑物的屋面上,生物安全柜排风管与所在室内的排风互锁,局部排风与排风不能同时开启。新风机组与排风系统都采用变频系统,以应对不同变风量处理过程。
5●环境消毒效果监测
监测方法:(1)物体表面采用2种方法进行监测:①按照GB15982-2012《医院消毒卫生标准》附录A 中物表的监测方法对消毒前后生物安全柜及台面进行采样、操作及效果评价。②按照上述(1)中物表的采样方法用新冠核酸检测试剂盒对消毒前后生物安全柜及台面进行采样,操作方法及效果评价均按试剂盒的说明书进行。
(2)室内空气:按照GB15982-2012《医院消毒卫生标准》附录A中空气的采样方法对实验前、实验过程中1h、2h、实验结束并消毒后4个时间段进行采样。
监测结果:①物体表面消毒前后及室内空气监测的4个时间段均未见细菌生长。
②物体表面采用新冠核酸检测方法进行的监测亦呈现阴性。